Краситель по Романовскому, используется только для окраски препаратов периферической крови. Краситель представляет собой 0,76 %
раствор сухого азур-эозина по Романовскому в метаноле и глицерине, в соотношении 1:1. Особенность данного красителя - экономичный
режим разведения (1:20 - 1:45) (краситель-забуференная вода) и растянутый интервал окраски препаратов (20 - 45мин), при этом не
перекрашиваются мазки. Рабочий раствор годен в течение суток. Окраска 10000-25000 препаратов в зависимости от разведения и метода
окрашивания.
Подготовка к анализу:
1. Для приготовления рабочего раствора красителя необходимо использование забуференной (рН 6,8 – 7, 2) воды.
2. Для этих целей можно использовать реагенты производства НПФ «АБРИС+» «Диахим-ГемиСтейн-Буфер-Г» кат.
№ 463 или кат.№ 464 , или приготовить самостоятельно.
Приготовление забуференной воды:
Вариант 1: Использовать «Диахим-ГемиСтейн-Буфер-Г», кат.№ 463. Приготовить согласно инструкции по применению.
Вариант 2: Использовать «Диахим-ГемиСтейн-Буфер-Г», кат.№ 464. Приготовить согласно инструкции по применению.
Вариант 3: Использовать «Диахим-Буфер-М» (для комплекта кат. № 436/484). Приготовить согласно инструкции по применению.
Вариант 4: Взвесить на аналитических весах с точностью ± 0,01 г 9,50 г натрия фосфорнокислого двузамещенного безводного
или 22,70 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного; навеску перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл,
добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной водой и тщательно
перемешать (раствор 1).
Взвесить на аналитических весах с точностью ± 0,01 г 9,07 г калия фосфорнокислого однозамещенного; навеску внести в мерный цилиндр
вместимостью 1000 мл, добавить 900 мл дистиллированной воды, перемешать до растворения, довести до 1000 мл дистиллированной
водой и тщательно перемешать (раствор 2).
Внести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл 63 мл раствора 1 и 37 мл раствора 2, довести до 1000 мл дистиллированной водой и
определить рН полученной забуференной воды на рН-метре; рН должен находиться в диапазоне 6,8 - 7,2.
Полученную забуференную воду можно хранить при комнатной температуре (+18 - 25°С).
Проведение анализа (методика окраски):
Мазки необходимо зафиксировать фиксатором-красителем по Май-Грюнвальду или типа Лейшмана в течение 2-3 минут.
Непосредственно перед окраской приготовить рабочий раствор: смешать краситель с забуференной водой в соотношении 1:20 - 1:45 и
профильтровать.
Полученный рабочий раствор красителя можно использовать в течение 6 часов.
Зафиксированные мазки крови БЕЗ ПРОМЫВКИ ПОСЛЕ ФИКСАЦИИ поместить в рабочий раствор красителя, по истечении 20-45 мин
препараты промыть проточной водой 3-5 сек, высушить на воздухе и микроскопировать.
Результаты окраски:
Окраска форменных элементов крови должна быть следующей:
- эритроциты - розовые, розовые с серым или бежевым оттенком, бежево-коричневые;
- тромбоциты - розово-фиолетовые или фиолетовые;
- ядра лимфоцитов, моноцитов и нейтрофилов - фиолетовые;
- цитоплазма лимфоцитов - голубая, серо-голубая или сине-голубая;
- цитоплазма моноцитов - серо-голубая;
- цитоплазма нейтрофилов - бледно-розовая или розово-серая;
- зернистость нейтрофилов - фиолетовая или красно-фиолетовая;
- зернистость эозинофилов - оранжево-красная, розово-красная или розово-фиолетовая;
- зернистость базофилов - фиолетовая.